PRACTICA 22: ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA ALCALINA EN LEUCOCITOS

IDENTIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA ALCALINA EN LEUCOCITOS

Este kit se utiliza para visualizar estructuras en material hematológico y clínico-citológico.

PRINCIPIO DEL MÉTODO
Para la delimitación citoquímica de una leucemia mieloica crónica de otras enfermedades del tipo de formas mielo-proliferativas, especialmente frente a la mielofibrosis y la policitemia o, respectivamente, otros procesos inflamatorios o tumorosos, es adecuada la determinación de la actividad de la fosfatasa alcalina de leucocitaria. Este índice representa un parámetro sencillo de transcurso en el caso de CML, que refleja diversas fases de actividad de la enfermedad hematológica. 
La fosfatasa alcalina de leucocitaria cataliza la hidrolisis de ésteres fosfóricos en medio alcalino. El 1-naftol liberado a partir del fosfato de 1-naftilo se acopla con una sal de diazonio para da un azocolorante pardo, que precipita en la célula de acuerdo con la localización y la actividad de la fosfatasa alcalina en la célula.

MUESTRA
Utilizamos frotis frescos.

REACTIVOS 
R1: Tris -aminometano
R2: Fosfato de 1-naftol sal sódico
R3: Variamin sal azul B


PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Los frotis frescos se deben secar durante mínimo 30 minutos. Se deben fijar con una mezcla preparada de metanol/fenol 9/1.
Sumergidos en la fijación los dejamos durante 2 minutos  y después los lavamos con agua del grifo durante 10 segundos



Dejamos secar completamente al aire. 

PREPARACIÓN DE REACTIVOS 
SOLUCIÓN A:
Añadimos con la cuchara que contiene el kit, 4 cucharadas de R1 + 100ml de agua destilada.
Removemos suavemente hasta que se disuelva completamente.




 SOLUCIÓN B:
Añadimos al frasco del R2 + 15 ml de solución A



 SOLUCIÓN DE TINCIÓN:
Añadimos 45ml de solución A con el R3. Agitar intensamente durante 2  minutos.
Filtrar a través de un filtro de papel la solución B
Mezclar completamente.







 PROCEDIMIENTO
Sumergimos compeltamente los portaobjetos en la cubeta de tinción. Se deben mover suavemente. Despues del tiempo en cada cubeta, los portaobjetos deben ser escurridos, para evitar el arrastre de soluciones.

Metemos el frotis en la solución de tincion durante 30 minutos, transcurrido ese tiempo lavar con agua destilada durante 5 minutos. Añadimos contratinción con hemalumbre en solución Mayer durante 5 minutos. Enjuagar con agua destilada. 
Secar al aire.

 RESULTADO
El resultado de color pardo se encuentra en las etapas de maduración final de la granulopoyesis.

Comentarios

Publicar un comentario

Entradas populares de este blog

PRACTICA 15: FIBRINOGENO METODO DE CLAUSS

Imagen
FIBRINOGENO METODO DE CLAUSS DETERMINACION CUANTITATIVA DE FIBRINOGENO PRINCIPIO DEL MÉTODO El Fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina.  El tiempo de formación del coágulo es inversamente  proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss1. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno . SIGNIFICADO CLÍNICO  El Fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación.  La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores ...
Leer más

PRACTICA 9: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO/RH MEDIANTE ID-CARD DIACLON

Imagen
DETERMINACION DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO/RH COMBINADO CON LA PRUEBA INVERSA O GRUPO SÉRICO INTRODUCCIÓN Los sueros anti-A y anti-B son necesarios para demostrar la presencia o ausencia de los antígenos A / B en hematíes humanos. La determinación de los grupos sanguíneos ABO requiere la realización de una contra prueba serológica o grupo inverso con plasma  suero para confirmar los resultados obtenidos en la prueba hemática.  Para la contra prueba serológica se utiliza hematíes con una especificidad antígeno -ABO conocida, para detectar la presencia o ausencia en el plasma o suero de las isoaglutininas anti-A y anti-B. Una discrepancia entre la determinación del antígeno y la contra prueba exige ampliar el estudio. La tarjeta ID-Card DiaClon ABO/D + reserve gruoping, permite en una ID-tarjeta determinar el grupo hemático y el grupo sérico para ABO, así como la determinación del antígeno RhD REACTIVOS  Hematíes-test: ID-Diacell A16b en la suspensión al 0.8 % en viale...
Leer más

PRACTICA 21: DETECCIÓN DE LA REACCIÓN DE LA PEROXIDASA EN LEUCOCITOS

Imagen
DETECCIÓN DE LA REACCIÓN DE LA PEROXIDASA EN LEUCOCITOS  PRINCIPIO DEL MÉTODO Se trata de un kit de tinción que se utiliza para la visualización de estructuras de destino, mediante fijación y tinción en material de examen hematológico y clínico-citológico. La reacción de peroxidasa, en particular la reacción citoquimicamente significativa de mieloperoxidasa, sirve de indicador para la presencia de elementos celulares mieloicos. El grado de madurez de los granulocitos en maduración puede ser estimulado según la intensidad de la reacción cromática pardo-negruzca. Las peroxidasas son catalasas lisosomales que transfieren el hidrógeno desde un donador adecuado a un peróxido. El donador 4-cloro-1-naftol se oxida y se transforma en un colorante insoluble pardo negruzco, que puede utilizarse como indicador de la correspondiente actividad de peroxidasas.  MATERIAL   Muestra debe ser un frotis fresco de sangre o médula ósea.  No se deben utilizar anticoagulantes RE...
Leer más