PRACTICA 15: FIBRINOGENO METODO DE CLAUSS

FIBRINOGENO METODO DE CLAUSS
DETERMINACION CUANTITATIVA DE FIBRINOGENO

PRINCIPIO DEL MÉTODO
El Fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina.  El tiempo de formación del coágulo es inversamente  proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss1. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

SIGNIFICADO CLÍNICO 
El Fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación.  La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en  terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y  pancreatitis1. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. 

REACTIVOS
R 1: Trombina Bovina
R 2: Tampón Imidazol
R 3: Solución Caolín 
Calibrador           
Control normal        

Control patológico

 



PREPARACIÓN 

El reactivo R1, hay que reconstituirlo con 2,0 ml de agua destilada. Lo tapamos y mezclamos suavemente hasta disolver su contenido. Mantendra una estabilidad durante 7 días a 2-8ºC o 1 mes a –20ºC, si se congela inmediatamente y se conserva en el frasco original. No volver a congelar.



 

MATERIAL   
- Coagulómetro o cronómetro con calefactor a 37ºC
- Cubetas para coagulómetro
- Pipetas automáticas y puntas

MUESTRA
Plasma obtenido por punción venosa 

PROCEDIMIENTO 
Mi grupo se encargará de preparar el calibrador y realizar su curva de calibración. 
Marcamos cinco tubos de 3 ml con las diluciones que vamos a realiza y añadimos la cantidad correspondiente de tampón imidazol. 
TUBO 1  1/40: Añadimos 3,90 ml de tampón imidazol. 
TUBO 2  1/30: Añadimos 2,90 ml de tampón imidazol. 
TUBO 3  1/20: Añadimos 1,90 ml de tampón imidazol. 
TUBO 4  1/10: Añadimos 0,90 ml de tampón imidazol. 

TUBO 5  1/5: Añadimos 0,40 ml de tampón imidazol.






Le añadimos 0,1ml de calibrador



Nos llevamos todo el material cerca del coagulómetro y en sus cubetas especiales para tal  añadimos 0,20 ml las mezclas anteriores. Las ponemos en el aparato para que tomen la temperatura de 37ºC.
Añadimos 20ul de solución Caolín y dejamos reposar durante 4-6 minutos
Trascurrido ese tiempo, colocamos en el medidor, tapamos y añadimos 100ul de trombina y medimos el tiempo. 
TUBO 1   1/40: 68,1 segundos 
TUBO 2   1/30: 43,5 segundos 
TUBO 3   1/20: 36,7 segundos 
TUBO 4   1/10: 20,3 segundos
TUBO 5   1/5: 15,1  segundo










Realizamos una grafica de calibración:


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