PRACTICA 2 HEMOGLOBINA

DETERMINACIÑON CUANTITATIVA DE  HEMOGLOBINA 

 PRINCIPIO DEL METODO

 Con esta práctica queremos conocer el valor de hemoglobina en unas determinada parte de la población. Cuando la hemoglobina es oxidada por acción del ferricianuro, se convierte en metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina.
Debemos conocer un valor de referencia, para con la intensidad de color poder saber la concentración de hemoglobina presente en la muestra.

 SIGNIFICADO CLINICO

 La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, y otorga en color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales, indica anemia y si esta por encima indica poliglobúlia.

 REACTIVOS

 HEMOGLOBIN 50x formado por:
  • Ferricianuro de potasio (0.60 mmol/L)
  • Cianuro de potasio (77 mmol/L)
  • Dihidrógeno fosfato de potasio (2mmol/L)
HEMOGLOBIN CAL:
Patrón de referencia de hemoglobina (15 g/dl)

HEMOGLOBIN STAND:
Patrón de referencia de hemoglobina (12 g/dl)

PREPARACION

El reactivo lo prepara el grupo 1. Según el protocolo necesitamos:
- Para 5 ml      4.9 ml de agua destilada + 2 gotas de reactivo
Vamos a realizar el método micro, por lo que cada grupo necesita 2.5 para su muestra ( total 12.5 ml), mas 2.5 ml para el calibrador o patrón y 2.5ml para el blanco. Por lo que hay que prepara en toral 17.5 ml de reactivo. Llegamos a la conclusión de que prepararemos 20ml para usar el calibrador Stand que no proporciona el profesor.
Necesitamos en resumen:
 17.5 ml de reactivo : 24.5 ml de agua destinada + 10gotas de reactivo
Lo mezclamos muy bien  y se puede conservar en nevera a 2-8ºc y liado en papel de aluminio para protegerlo de la luz. En nuestro ensayo no sobra.

MATERIAL
Espectrofotómetro 
Cubetas de 1 cm

 PROCEDIMIENTO
Encendemos el espectrofotómetro para que vaya tomando temperatura y lo programamos a 540nm. Lo ajustamos a 0 frente a agua destilada. 
Realizamos el método micro, pipeteamos
Tubo 1: 2,5 ml de Hemoglobin
Tubo 2: 2,5 ml de Hemoglobin + 10ul de patrón de hematíes
Tubo 3: 2,5 ml de Hemoglobin + 10ul de la muestra
Mezclamos e incubamos 3 minutos a temperatura ambiente.
Leemos la Absorbancia del calibrador y la muestra frente al blanco.
Patrón: 0,342 A
Muestra: 0,459A

 CALCULOS 
(0,342 / 0,459) x 12 = 16,10 g/dl

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